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dna粗提取與鑒定
實(shí)驗(yàn)原理
DNA在氯化鈉溶液中的溶解度，是隨著氧化鈉的濃度的變化而改變的。當(dāng)氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為 2 mol/L時(shí)，DNA的溶解度最大，濃度為 0.14 mol/L時(shí)，DNA的溶解度最低。利用這一原理，可以使溶解在氯化鈉溶液中的DNA析出。
DNA不溶于95%的酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些物質(zhì)則可以溶于酒精溶液。利用這一原理，可以進(jìn)一步提取出含雜質(zhì)較少的DNA。
DNA中含有脫氧核糖，能與二苯胺(沸水浴)反應(yīng)生成藍(lán)色物質(zhì)，因此，二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。
目的要求
1. 學(xué)會(huì)DNA的粗提取和鑒定的方法。
2. 觀察提取出來(lái)的DNA物質(zhì)的顏色和形狀。
材料用具
材料：活雞或鮮血雞血。
儀器：離心機(jī)、恒溫水裕鍋、載玻片，玻璃棒，濾紙，滴管，量簡(jiǎn)(100 mL，l個(gè))，燒杯(100 mL，l個(gè)，50 mL、500 mL各 2個(gè))，試管(20 mL，2個(gè))，漏斗，試管夾，紗布。
試劑：酒精的體積分?jǐn)?shù)為95%的溶液(實(shí)驗(yàn)前置于冰箱內(nèi)冷卻24 h)，蒸餾水，檸檬酸鈉的質(zhì)量濃度為 0.1g/mL的溶液，氯化鈉的物質(zhì)的量濃度分別為 2 mol/L和0.015 mol/L的溶液，二苯胺試劑。
方法步驟
實(shí)驗(yàn)前需要制備雞血細(xì)胞液(由教師完成)，制備的方法是：取檸檬酸鈉的質(zhì)量濃度為 0.1 g/mL的溶液(抗凝劑)100 mL，置于500 mL燒杯中。將宰殺活雞流出的雞血(約180 mL)注入燒杯中，同時(shí)用玻璃棒攪拌，使血液與檸檬酸鈉溶液充分混合，以免凝血。然后，將血液倒入離心管內(nèi)，用 1000 r/min的離心機(jī)離。2min，此時(shí)血細(xì)胞沉淀于離心管底部。實(shí)驗(yàn)時(shí)，用吸管除去離。心管上部的澄清液，就可以得到雞血細(xì)胞液。
1.提取雞血細(xì)胞的細(xì)胞核物質(zhì)
將制備好的雞血細(xì)胞液5 mL～10mL，注入到50 mL燒杯中。向燒杯中加入蒸餾水20 mL，同時(shí)用玻璃棒充分?jǐn)嚢? min，使血細(xì)胞加速破裂。然后，用放有紗布的漏斗將血細(xì)胞液過(guò)濾至500mL。取其濾液。
2.溶解細(xì)胞核內(nèi)的DNA
將氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為 2 mol的溶液40mL加入到濾液中，并搖動(dòng)燒杯，使其混合均勻，這時(shí)DNA在溶液中呈溶解狀態(tài)。
3.析出含DNA的粘稠物
沿?zé)瓋?nèi)壁緩緩加入蒸餾水，同時(shí)用玻璃棒不停地輕輕攪拌，這時(shí)燒杯中有絲狀物出現(xiàn)，注意觀察絲狀物呈什么顏色。繼續(xù)加入蒸餾水，溶液中出現(xiàn)的粘稠物會(huì)越來(lái)越多。當(dāng)粘稠物不再增加時(shí)停止加入蒸餾水(這時(shí)溶液中氯化鈉的物質(zhì)的量濃度相當(dāng)于0.14 mol/L)。
4.濾取含DNA的粘稠物
用放有多層紗布的漏斗，過(guò)濾步驟3中的溶液至 500mL的燒杯中，含 DNA的粘稠物被留在紗布上。
5.將DNA的粘稠物再溶解
取 1個(gè) 50 mL燒杯，向燒杯內(nèi)注入氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為 2 mol/L的溶液 20mL。用鈍頭鑷子將紗布上的粘稠物夾至氯化鈉溶液中，用玻璃擇不停地?cái)嚢瑁拐吵砦锉M可能多地溶解于溶液中。
6.過(guò)濾含有DNA的氯化鈉溶液
取1個(gè)100 mL燒杯，用放有兩層紗布的漏斗過(guò)濾步驟5中的溶液。取其濾液，DNA溶于濾液中。
7.提取含雜質(zhì)較少的DNA
在上述濾過(guò)的溶液中，加入冷卻的、酒精的體積分?jǐn)?shù)為 95%的溶液 50mL(使用冷卻的酒精，對(duì)DNA的凝集效果較佳)，并用玻璃棒攪拌，溶液中會(huì)出現(xiàn)含雜質(zhì)較少的絲狀物。用玻璃棒將絲狀物卷起，并用濾紙吸取上面的水分。這種絲狀物的主要成分就是DNA 。注意觀察絲狀物是什么顏色的。
8.DNA的鑒定
取兩支20 mL的試管，各加入氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為0.015 mol/L的溶液5 mL，將絲狀物放入其中一支試管中，用玻璃棒攪拌，使絲狀物溶解。然后，向兩支試管中各加入4mlL的二苯胺試劑�；旌暇鶆蚝�，將試管置于沸水中加熱 5 min，待試管冷卻后，觀察并且比較兩支試管中溶液顏色的變化。將觀察的結(jié)果填寫(xiě)在《實(shí)驗(yàn)報(bào)告冊(cè)》上。
結(jié)論
步驟8的2支試管中溶液顏色的變化說(shuō)明了什么?將得出的結(jié)論填寫(xiě)在《實(shí)驗(yàn)報(bào)告冊(cè)》上。
討論
1.提取雞血中的DNA時(shí)，為什么要除去血液中的上清液?
2.步驟回和步驟3中都需要加入蒸餾水，兩次加入的作用相同嗎?為什么?
3.DNA的直徑約為20×10-10 m，實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的絲狀物的粗細(xì)是否表示1個(gè)DNA分子直徑的大小?
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