食品安全檢測(cè)中關(guān)于微生物快速檢測(cè)方法的淺析
微生物包括：細(xì)菌、病毒、真菌以及一些小型的原生生物、顯微藻類等在內(nèi)的一大類生物群體，它個(gè)體微小，與人類關(guān)系密切。涵蓋了有益跟有害的眾多種類，接下來就由小編帶來食品安全檢測(cè)中微生物快速檢測(cè)方法的淺析，希望對(duì)你有所幫助！
摘 要：傳統(tǒng)的食品微生物檢驗(yàn)方法，主要包括形態(tài)檢查和生化方法，其準(zhǔn)確性、靈敏性均較高，但涉及的實(shí)驗(yàn)較多、操作煩瑣、需要時(shí)間較長(zhǎng)、準(zhǔn)備和收尾工作繁重，而且要有大量人參與。所以，準(zhǔn)確、省時(shí)、省力和省成本的快速檢驗(yàn)方法是食品微生物檢測(cè)領(lǐng)域的迫切需要。
關(guān)鍵詞：食品微生物 快速檢測(cè) 技術(shù)
隨著人們生活水平的提高，食品安全問題越來越受到人們的重視，其中微生物對(duì)食品的污染問題也相應(yīng)地備受關(guān)注，在食品生產(chǎn)、加工、儲(chǔ)存、運(yùn)輸、銷售等各個(gè)環(huán)節(jié)中都有污染微生物的可能。一旦污染，微生物將大量繁殖而引起食品腐 敗變質(zhì)，或?qū)е率吃葱愿腥竞褪澄镏卸尽Ｋ�，探討食品安全檢測(cè)中關(guān)于微生物環(huán)節(jié)的快速檢測(cè)方法顯得尤為重要，我們對(duì)目前常用的食品微生物快速檢測(cè)方法從以下幾個(gè)方面淺析：
1 生物化學(xué)技術(shù)
食品微生物快速檢測(cè)采用生物化學(xué)技術(shù)手段的途徑，目前最成常用的是PCR技術(shù)。PCR技術(shù)的原理是采用體外酶促反應(yīng)合成特異性DNa 片段，再通過擴(kuò)增產(chǎn)物來識(shí)細(xì)菌。由于PCR靈敏度高，理論上可以檢出一個(gè)細(xì)菌的拷貝基因，因此在細(xì)菌的檢測(cè)中只需短時(shí)間增菌甚至不增菌，即可通過PCR進(jìn)行篩選，這樣做節(jié)約了大量時(shí)間，這也是目前食品微生物快速檢測(cè)所需要的優(yōu)點(diǎn)。但PCR技術(shù)也存在以下幾個(gè)缺點(diǎn)：
1.1 食物成分、增菌培養(yǎng)基成分和其他微生物DNA對(duì)Taq酶具有抑制作用，可能導(dǎo)致檢驗(yàn)結(jié)果假陰性；
1.2 操作過程要求嚴(yán)格，微量的外源性DNA進(jìn)入PCR后可以引起無限放大產(chǎn)生假陽性結(jié)果；
1.3 擴(kuò)增過程中有一定的裝配誤差，也會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生影響。
2 基因探針技術(shù)
基因探針技術(shù)的原理是利用目標(biāo)細(xì)胞具有同源性序列的核酸單鏈在適當(dāng)條件下互補(bǔ)形成穩(wěn)定的DNAO RNA或DNAD DNA鏈的原理，采用高度特異性基因片段制備基因探針來識(shí)別細(xì)菌�；蛱结樀膬�(yōu)點(diǎn)是減少了基因片段長(zhǎng)度多態(tài)性所需要分析的條帶數(shù)。目前比較成熟的有基因探針檢測(cè)系統(tǒng)，該系統(tǒng)對(duì)于分離到的單個(gè)菌落，可以30rain完成微生物的確證試驗(yàn)。但是基因探針的缺點(diǎn)是不能鑒定目標(biāo)菌以外的其他菌，所以適用領(lǐng)域相對(duì)比較狹窄。
3 微生物測(cè)試片法
微生物測(cè)試片作為食品微生物快速檢測(cè)手段的優(yōu)勢(shì)是可分別檢測(cè)菌落總數(shù)、大腸菌群計(jì)數(shù)、霉菌和酵母的計(jì)數(shù)，目前國(guó)際先進(jìn)的產(chǎn)品除上述項(xiàng)目外還有檢測(cè)乳桿菌、沙門菌、葡萄球菌的功能。這種微生物測(cè)試片方法與傳統(tǒng)檢測(cè)方法之間的相關(guān)性非常好。如用大腸菌群快檢紙片檢測(cè)餐具的表面，操作簡(jiǎn)便、快速、省料，特異性和敏感性與發(fā)酵法符合率高，已經(jīng)被列為國(guó)標(biāo)方法。使用時(shí)只要正確掌握操作技術(shù)和判斷標(biāo)準(zhǔn)，就可以達(dá)到理想的檢測(cè)效果，例如，霉菌快速檢驗(yàn)紙片。應(yīng)用于食品檢驗(yàn)中霉菌的檢測(cè)操作起來非常簡(jiǎn)便，僅需36~C培養(yǎng)，不需要低溫設(shè)備，大大節(jié)約了檢測(cè)時(shí)間，一般僅需2天就可觀察到結(jié)果，比現(xiàn)在的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法縮短3到5天的時(shí)間，從而大大提高了工作效率。實(shí)際效果上，紙片法與國(guó)標(biāo)法在霉菌檢出率上差異無顯著性，且菌落典型，易判定。還有一種紙片熒光法是利用細(xì)菌產(chǎn)生的某些代謝酶或代謝產(chǎn)物的特點(diǎn)而建立的一種快速判定方法，操作起來只需檢測(cè)食品中大腸菌群、大腸桿菌的有關(guān)酶的活性就能很快得出該類菌群是否超標(biāo)的信息。
4 免疫學(xué)技術(shù)
免疫學(xué)技術(shù)的原理是通過抗原和抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)，再輔以免疫放大技術(shù)來鑒別細(xì)菌。免疫方法的優(yōu)點(diǎn)是樣品在進(jìn)行選擇性增菌后，不需分離，即可采用免疫技術(shù)進(jìn)行篩選。由于免疫法有較高的靈敏度，樣品經(jīng)增菌后可在較短的時(shí)間內(nèi)達(dá)到檢出度，抗原和抗體的結(jié)合反應(yīng)可在很短時(shí)間內(nèi)完成。如采用免疫磁珠法可有效地收集、濃縮神奈川現(xiàn)象陽性的副溶血性弧菌，可顯著提高環(huán)境樣品及食品中病原性副溶血性弧菌的檢出率。還有一種膠體金免疫層析法能快速、靈敏的檢測(cè)出食品中的金黃色葡萄球菌、沙門氏茵，操作起來簡(jiǎn)便快速，無需特殊儀器設(shè)備，適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)之用。目前比較常用的ATP生物發(fā)光法就是利用免疫學(xué)技術(shù)原理的最好案例，也是近年發(fā)展較快的一種用于食品生產(chǎn)加工設(shè)備潔凈度檢測(cè)的快速檢測(cè)方法。用ATP生物發(fā)光分析技術(shù)檢測(cè)肉類食品細(xì)菌污染狀況或食品器具的現(xiàn)場(chǎng)衛(wèi)生學(xué)檢測(cè)，都能夠達(dá)到快速適時(shí)的目標(biāo)。
5 細(xì)菌直接計(jì)數(shù)法
主要原理是利用流式細(xì)胞儀(英文floweytometry，簡(jiǎn)稱為FCu)和固相細(xì)胞計(jì)數(shù)(英文solid phase cytometry，簡(jiǎn)稱sPC)來進(jìn)行細(xì)菌的測(cè)定。FCM通常以激光作為發(fā)光源。經(jīng)過聚焦整形后的光束垂直照射在樣品流上，被熒光染色的細(xì)胞在激光束的照射下產(chǎn)生散射光和激發(fā)熒光。光散射信號(hào)基本上反映了細(xì)胞體積的大�。粺晒庑盘�(hào)的強(qiáng)度則代表了所測(cè)細(xì)胞膜表面抗原的強(qiáng)度或其核內(nèi)物質(zhì)的濃度，由此可通過儀器檢測(cè)散射光信號(hào)和熒光信號(hào)來估計(jì)微生物的大小、形狀和數(shù)量。流式細(xì)胞計(jì)數(shù)具有高度的`敏感性，可同時(shí)對(duì)目的菌進(jìn)行定性和定量。目前已經(jīng)建立了細(xì)菌總數(shù)、致病性沙門菌、大腸埃希氏菌等的FCM檢驗(yàn)方法。固相細(xì)胞計(jì)數(shù)可以在單個(gè)細(xì)胞水平對(duì)細(xì)菌進(jìn)行快速檢測(cè)。濾過樣品后，存留的微生物在濾膜上進(jìn)行熒光標(biāo)記，采用激光掃描設(shè)備自動(dòng)計(jì)數(shù)。每個(gè)熒光點(diǎn)可直觀地由通過計(jì)算機(jī)驅(qū)動(dòng)的流動(dòng)臺(tái)連接到熒光顯微鏡來檢測(cè)。這種方法尤其對(duì)于生長(zhǎng)緩慢的微生物，檢測(cè)迅速快捷，明顯優(yōu)于傳統(tǒng)平板計(jì)數(shù)法。
6 全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)(AMS)
AMS是一種由傳統(tǒng)生化反應(yīng)及微生物檢測(cè)技術(shù)與現(xiàn)代計(jì)算機(jī)技術(shù)相結(jié)合。運(yùn)用概率最大近似值模型法進(jìn)行自動(dòng)微生物檢測(cè)的技術(shù)，可鑒定由環(huán)境、原料及產(chǎn)品中分離的微生物。AMS僅需4 b一1sb即可報(bào)告結(jié)果，以常規(guī)法鑒定細(xì)菌，只能得到是或不是某種菌，要想知到是哪種菌還要做大量、煩瑣的生化試驗(yàn)，而AMS則可以直接報(bào)告是什么菌。目前國(guó)際上最為先進(jìn)、自動(dòng)化程度最高的AMS細(xì)菌鑒定儀器，對(duì)細(xì)菌的鑒定是以每種細(xì)菌的微量生化反應(yīng)為基礎(chǔ)，可鑒定405種細(xì)菌。用AMS明顯縮短腸道菌生化鑒定的時(shí)間，如鑒定沙門菌屬只需4小時(shí)，鑒定志賀氏菌屬只需6小時(shí)，鑒定霍亂弧菌等致病性弧菌亦只需4一13個(gè)小時(shí)的時(shí)間。
總之，隨著現(xiàn)代科技的發(fā)展，可以預(yù)料在不遠(yuǎn)的將來，傳統(tǒng)的微生物檢測(cè)技術(shù)將逐漸被各種新型簡(jiǎn)便的微生物快速診斷技術(shù)所取代。近年來興起的基因探針技術(shù)及全自動(dòng)微生物檢測(cè)系統(tǒng)，將從根本上改變微生物的檢測(cè)方法，具有非常廣闊的應(yīng)用前景。
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