- 相關推薦
化膿及創(chuàng)傷感染標本細菌學檢驗知識
膿液及創(chuàng)傷分泌物是傳染過程中最常見的，對其標本的采集和送檢，檢驗人員與執(zhí)業(yè)醫(yī)師網(wǎng)臨床醫(yī)師應密切配合，以確保正確的采集和快速送檢。從膿液及創(chuàng)傷分泌物中能夠檢出的細菌種類很多，最優(yōu)先考慮的致病菌為金黃色葡萄球菌、化膿性鏈球菌，其次為假單胞菌、腸桿菌科細菌等。下面是小編為大家?guī)淼幕摷皠?chuàng)傷感染標本細菌學檢驗知識，歡迎閱讀。
知識1：
一、膿液及創(chuàng)傷感染標本中可能發(fā)現(xiàn)的細菌
在臨床化膿及創(chuàng)傷感染標本的細菌學檢驗中可能發(fā)現(xiàn)的細菌：
1.革蘭陽性球菌
葡萄球菌、鏈球菌、肺炎鏈球菌、四聯(lián)球菌。
2.革蘭陰性球菌
卡他布蘭漢菌、淋病奈瑟菌、腦膜炎奈瑟菌、干燥球菌、黃色球菌。
3.革蘭陽性桿菌
破傷風芽胞梭菌、炭疽芽胞桿菌、產(chǎn)氣莢膜芽胞梭菌、白喉棒狀桿菌、類白喉棒狀桿菌、結核分枝桿菌。
4.革蘭陰性桿菌
大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、變形桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌、鼠疫耶爾森菌、土拉熱弗朗西斯菌、肺炎克雷伯菌、厭氧桿菌。
5.其他
伊色列放線菌、星形奴卡菌、白色假絲酵母菌。
二、標本的采集
(一)操作
1.首先用無菌生理鹽水拭凈病灶表面的污染雜菌。
2.對已破潰膿腫一般以無菌棉拭子采取膿液及病灶深部的分泌物，而瘺管則以無菌方法采取組織碎片，放入無菌試管中送檢。
3.對未破潰膿腫最好用2.5%～3%碘酊和75%酒精消毒患部皮膚后，以無菌注射器抽取膿汁及分泌物，也可于切開排膿時，以無菌棉拭采取。
4.有時也可將沾有膿汁的最內(nèi)層敷料放入無菌平皿內(nèi)送檢。
5.對放線菌的標本，常用無菌棉拭擠壓瘺管，選取流出膿汁中的“硫磺樣顆粒”盛于試管內(nèi)送檢，也可將滅菌紗布塞入瘺管內(nèi)。次日取出送檢。
(二)注意事項
1.如果患者局部傷口已用抗生素磺胺類藥物治療，則應在培養(yǎng)基內(nèi)加入相應的物質(zhì)(如青霉素酶、對氨基苯甲酸等)以避免假陰性結果的出現(xiàn)。
2.當創(chuàng)傷出血時或敷有藥物在2小時以內(nèi)及燒傷在12小時內(nèi)均不應采集標本，此時獲得陽性結果的機會甚少。
3.標本采取后應及時檢查，如不能立即檢驗應置冰箱內(nèi)保存，以防雜菌污染。
4.采集標本時注意觀察膿汁及分泌物的性狀，色澤及有無惡臭味等，為培養(yǎng)和鑒定提供參考依據(jù)。如膿汁帶綠色時，可能有銅綠假單胞菌的感染，有惡臭味時可能有厭氧菌感染。
三、檢驗程序
膿液及創(chuàng)傷感染標本的細菌學檢驗程序參見圖
化膿及創(chuàng)傷感染標本的檢驗程序
四、檢驗方法及報告方式
(一)直接涂片檢查
1.一般細菌涂片檢查
取一潔凈玻片，用玻璃筆標明標本號、將待檢標本置于玻片上涂成薄膜，經(jīng)火焰固定后進行革蘭染色鏡檢。根據(jù)鏡下所見細菌的形態(tài)及染色特點，可做初步報告：“找到革蘭X性X菌，形似XX菌”。如發(fā)現(xiàn)具有芽胞或莢膜的細菌，報告時應注明其大小與位置及疑似XX菌。如鏡檢時未發(fā)現(xiàn)細菌時，可初步報告為：“直接涂片，未找到細菌”。對疑有結核分枝桿菌感染的標本，還應作抗酸染色檢查。
2.伊色列放線菌及星形奴卡菌涂片檢查
用肉眼或放大鏡檢查膿汁、分泌物或敷料內(nèi)有無直徑1mm以下的灰白色或硫磺樣顆粒，用接種環(huán)挑取含有硫磺樣顆粒的標本置于潔凈的玻片內(nèi)，覆以蓋玻片，輕輕擠壓。若顆粒結構不明顯，可加50g～100g/L的氫氧化鉀溶液2～3滴加以消化。用低倍鏡及高倍鏡仔細觀察。如有伊色列放線菌的顆粒，可見中央為交織的菌絲，菌絲的末端稍膨大似棒狀排列并呈放射狀。有時可見嵌于類似明膠的鞘膜內(nèi)。奴卡菌與伊色列放線菌形態(tài)基本上相同，但在分枝菌絲末端一般不膨大成棒狀，革蘭染色陽性，抗酸染色呈抗酸性;而伊色列放線菌革蘭染色陽性，抗酸染色呈藍色，為非抗酸性。如查見中間部分菌絲染成革蘭陽性，向四周放射的末梢部分菌絲呈革蘭陰性，抗酸染色為非抗酸性者，可報告：“找到伊色列放線菌”;若革蘭染色反應與伊色列放線菌相同，而抗酸染色為抗酸性者，可報告為：“找到奴卡菌�！�
如革蘭染色為陰性，抗酸染色為非抗酸性者，可報告：“未找到伊色列放線菌及星形奴卡菌”。
(二)培養(yǎng)檢查
1.一般細菌培養(yǎng)
取膿汁棉拭子或?qū)⒛撝媒臃N環(huán)接種于血平板上劃線分離，置37℃孵箱培養(yǎng)18～24h，觀察結果，如有細菌生長，可按菌落特征挑取各種單獨的菌落，分別涂片進行革蘭染色鏡檢。通常根據(jù)菌落特點結合涂片結果，多可初步判斷出細菌的類屬，然后再按各類細菌的生物學性狀進行鑒定。菌落小如針尖，周圍伴有大而透明的溶血環(huán)可能為溶血性鏈球菌，結合鏡檢有助于鑒別，必要時進行血清肉湯培養(yǎng)，若出現(xiàn)沉淀生長且涂片染色為長鏈狀排列，即可報告：“培養(yǎng)出乙型溶血性鏈球菌�！毖桨迳弦娭械却笮∮兄苄越瘘S色色素或無特殊色素有透明溶血環(huán)，涂片染色為革蘭陽性球菌呈葡萄狀排列，可進一步作甘露醇發(fā)酵試驗，血漿凝固酶試驗等，如陽性時，可報告：“培養(yǎng)出金黃色葡萄球菌”。如見到菌落與醫(yī).學全在線上述近似但無溶血環(huán)，血漿凝固酶試驗陰性，可初步報告：“培養(yǎng)出血漿凝固酶陰性葡萄球菌”。如見菌落小，周圍有草綠色溶血環(huán)，染色鏡檢為革蘭陽性球菌，呈短鏈排列多為甲型溶血性鏈球菌，呈雙排列多為肺炎鏈球菌。確定診斷則需進一步作鑒定試驗和鑒別試驗。如有變形桿菌生長而影響其他細菌分離，可將標本接種于含有4g/L硼酸的血平板上，以抑制變形桿菌生長，再進行分離培養(yǎng)、鑒定。根據(jù)鑒定結果及菌落的多少，即可報告：“培養(yǎng)出XX菌”。如觀察48小時后，無細菌生長，可報告：“培養(yǎng)48小時后，無細菌生長”。若遇到難以鑒定的細菌時，應詳細描述革蘭染色性質(zhì)、菌體以及菌落的形態(tài)特點、生化反應、血清學試驗結果等，必要時做G+C摩爾百分比濃度測定、動物試驗觀察其致病力，以供臨床醫(yī)師參考。
2.炭疽芽胞桿菌培養(yǎng)
疑為炭疽芽胞桿菌感染時，可取患部膿液接種于血平板，對于污染嚴重的標本，可首先在肉湯培養(yǎng)基內(nèi)增菌一夜后，經(jīng)80℃20分鐘加熱，殺滅非芽胞細菌，然后再移種血平板作分離培養(yǎng)，經(jīng)37℃18～24h培養(yǎng)后，如在血平板上見有大而扁平、毛茸狀、灰白色、邊緣不整齊，形似卷發(fā)狀(以低倍鏡下觀察更為清楚)不溶血的菌落，則挑取菌落涂片染色鏡檢，如為革蘭陽性竹節(jié)狀大桿菌，排列呈鏈狀，懸滴檢查無動力，則可作出初步診斷，必要時再做動物接種以及串珠試驗和噬菌體裂解等鑒別試驗，并作出結論。
3.厭氧菌培養(yǎng)
疑為厭氧菌感染的標本，可將標本接種于牛心、牛腦浸出液或布氏菌肉湯培養(yǎng)基中，亦可直接接種KVA血平板(或LKV血平板)，置厭氧環(huán)境中培養(yǎng)。分離厭氧芽胞桿菌如破傷風芽胞梭菌及產(chǎn)氣莢膜芽胞梭菌時，應將已接種標本的液體培養(yǎng)基先置80℃水浴中加熱20分鐘殺滅非芽胞細菌，然后經(jīng)37℃24～48h培養(yǎng)后，根據(jù)生長情況及涂片染色鏡檢結果，按該厭氧菌的生物學性狀(生化反應和動物試驗)進行鑒定。經(jīng)最后證實，即可報告：“培養(yǎng)出XX菌”。若經(jīng)3～5天培養(yǎng)仍未見細菌生長者，即可報告：“厭氧培養(yǎng)X天未見細菌生長”。
4.伊色列放線菌及星形奴卡菌培養(yǎng)
(1)若疑有雜菌污染的瘺管引流液，應首先將標本倒入無菌平皿內(nèi)，以無菌蒸餾水洗滌溶解血細胞后，再挑選典型或可疑的硫磺樣顆粒，將其壓碎，然后分別接種于兩份葡萄糖肉湯瓊脂平板上置37℃進行需氧及厭氧培養(yǎng)，同時接種沙保弱葡萄糖瓊臘斜面(或平板)上，置22℃～28℃培養(yǎng)。如無硫磺樣顆粒，也可取標本直接接種于上述培養(yǎng)基。
(2)對于未被細菌或真菌污染的標本，可直接采取硫磺樣顆�；蚰撘航臃N人硫乙醇酸鈉肉湯或深層葡萄糖肉湯瓊脂培養(yǎng)基，置37℃進行厭氧培養(yǎng)，同時接種沙保弱葡萄糖瓊脂斜面，置22℃～28℃培養(yǎng)。
(3)經(jīng)4天培養(yǎng)后，若在厭氧培養(yǎng)的葡萄糖肉湯瓊脂平板上見有白色、粗糙或結節(jié)狀的菌落生長，粘附于培養(yǎng)基上不易用接種環(huán)取下，且在鹽水內(nèi)不易乳化，而在需氧培養(yǎng)的平板上則無類似菌落生長時，可疑為伊色列放線菌。
(4)將疑為伊色列放線菌的菌落移種于硫乙醇酸鈉肉湯管的底部：置37℃培養(yǎng)4～6天后，可見有白色絨毛樣菌團物長出，搖動后破碎，上部培養(yǎng)液仍保持澄清。移種于葡萄糖肉湯瓊脂作深層培養(yǎng)，經(jīng)37℃培養(yǎng)4～6天后，可見在深層培養(yǎng)管表面下層出現(xiàn)分葉狀的菌落。取菌落作涂片鏡檢，可見有交織成團或小碎片狀菌絲，抗酸染色為非抗酸性菌絲，可報告：“有伊色列放線菌生長”。
(5)如有奴卡菌生長，則在需氧培養(yǎng)的沙保弱培養(yǎng)基上出現(xiàn)光滑、不規(guī)則折疊或顆粒狀的菌落，具有黃色至橙黃色的顏色，取菌落作濕片鏡檢，如發(fā)現(xiàn)精細分枝狀菌絲，呈革蘭陽性，抗酸性染色呈紅色的菌絲者，可報告：“有奴卡菌生長”。
(三)抗生素敏感試驗提示
1.接到標本后，48小時內(nèi)應得出抗生素敏感試驗結果。
2.由于鏈球菌、巴斯德菌和放線菌等幾乎都對青霉素敏感，故不必對其測試抗生素敏感性。
3.耐苯唑西林的葡萄球菌對頭孢菌素亦耐藥，耐青霉素的葡萄球菌對氨芐西林亦耐藥，不必重復測試。
知識2：
一、膿液是什么？
膿液（pus）是機體局部炎癥組織壞死的溶解產(chǎn)物。在炎癥過程中,由于局部血液循環(huán)嚴重障礙及病原菌的內(nèi)、外毒素作用等,可發(fā)生局部組織營養(yǎng)不良及變性,最后導致壞死。壞死組織在細菌毒素及死亡的白細胞釋放出的蛋白酶作用下,水解化為肉眼呈灰黃色或黃白色的濃稠狀液體。一個白細胞處理5～25個病菌后就會死亡，死亡的白細胞體和細菌分解產(chǎn)物構成膿液。因此膿液中主要由組織分解產(chǎn)物、炎癥滲出物、白細胞及死亡的細菌等組成。
二、微生物生長需要的條件？人工培養(yǎng)細菌需要提供充足的營養(yǎng)物質(zhì)如：水、碳源、氮源、無機鹽等，使細菌獲得生長繁殖所需要的原料和能量。除此之外尚要有適宜的環(huán)境條件，如酸堿度、滲透壓、溫度和必要的氣體等，多數(shù)細菌在代謝過程中需要CO2，但分解糖類時產(chǎn)生的CO2已足夠其所需，且空氣中還有微量CO2，不必額外補充，只有少數(shù)菌如布魯菌、腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等必須在5%-10%CO2環(huán)境中才能生長。
三、如何采集膿液和創(chuàng)傷分泌物標本才能滿足細菌培養(yǎng)要求呢？檢驗項目：膿汁和創(chuàng)面分泌物的一般細菌涂片、真菌涂片、結核菌涂片、細菌培養(yǎng)及鑒定。標本采集方法：
1、局部組織或器官有化膿性感染表現(xiàn)任何標本進行細菌培養(yǎng)實驗室建議在抗菌藥物使用前進行采樣；采樣前可用無菌生理鹽水清洗病灶表面的污染雜菌，采集后立即送檢。
2、對已破潰開放性膿腫用無菌生理鹽水或75%酒精擦去表面滲出物，用無菌拭子深入潰瘍基底部或邊緣部取，注意盡量取化膿組織與正常組織交界處的膿汁，因為膿汁中心的細菌大部分已死亡，交界處的活菌較多，會提高陽性率。需取兩個拭子置無菌管中送檢，分別做細菌涂片和培養(yǎng)檢查。
3、封閉性膿腫：一般采用穿刺或手術引流的方法采取。采集前用75%酒精消毒膿腫局部皮膚或黏膜表面后，用無菌注射器穿刺抽取膿液5-10ml，置無菌管中送檢；也可切開排膿用無菌棉拭子采取深部的分泌物送檢。
4、對瘺管的標本，常用無菌棉拭子擠壓，選取膿汁中“硫磺樣顆�！保糜跓o菌管中送檢。
5、如有惡臭等懷疑厭氧菌感染時，標本采集后應在30分鐘內(nèi)送檢。硫磺樣顆粒：在患者病灶組織和瘺管中流出的膿汁中，肉眼可見的由放線菌在組織中形成的黃色小顆粒狀菌落。
6、燒傷傷口：先清創(chuàng)，出現(xiàn)滲出物后用拭子用力采集病灶基底部或邊緣的標本。也可送組織標本。
7、膿皰或水皰：用酒精進行表面消毒，待消毒液干燥，用針頭（小兒用23號針頭）挑破膿皰，用拭子采集膿皰液和基底部標本。
三、注意事項：
�、俨蓸忧安≡罹植繎苊庥每咕幬锘蛳緞�，應在用藥之前采取。
�、趯Υ蠖鄶�(shù)開放傷口，采集前應先清創(chuàng)，去除表面菌群。
�、鄢怯袧B出物，干燥、結痂傷口取材一般不做培養(yǎng)。
④閉合膿腫應取滲出物和膿腫壁標本，不能用拭子采集。開放膿腫處理同開放傷口。
�、莶灰獌H僅送檢膿液，應在病灶活動區(qū)域或基底部采集標本，最好是組織標本。
四、標本送檢與保存
1、送檢地點：南大港醫(yī)院二樓檢驗科。
2、標本采集后應盡快送檢，如果在1h內(nèi)不能及時送檢可保存在4℃冰箱中，但保存時間不超過24h。
3、懷疑淋病奈瑟菌、腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌和厭氧菌感染需常溫立即送檢；禁止冷藏。
如果沒能及時送檢，放常溫超過1小時，細菌快速生老病死失去了診斷價值；放到4℃冰箱，淋病奈瑟菌和腦膜炎奈瑟菌又會被凍死；因此一個合格的微生物檢驗標本對檢驗前的各個環(huán)節(jié)，無論是采集指證、嚴格的無菌采集、標本送檢及保存等過程實施有效的檢驗前質(zhì)量控制是提高病原微生物檢出率，保障醫(yī)療質(zhì)量，有效指導臨床用藥的基本前提和先決條件。
【化膿及創(chuàng)傷感染標本細菌學檢驗知識】相關文章：
生殖道標本的微生物檢驗知識01-17
醫(yī)學檢驗標本的采集原則04-21
標本溶血的控制及對檢驗結果的影響08-22
血液標本放置時間對檢驗結果影響08-09
檢驗尿液標本怎么采集和保存04-19
標本溶血對檢驗結果的影響及其處理方法08-10
血液檢驗標本留取前的準備與注意事項09-14
溶血及脂血標本對生化檢驗項目的影響08-04