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原發(fā)性高血壓病不同證型PPARγ基因研究
1 資料與方法
1.1 研究對象
1.1.1 病例選擇2008～2009年在石家莊市中醫(yī)院門診或病房首次確診為EH陰虛陽亢型25例（設為陰虛陽亢組），痰濕壅盛型25例（設為痰濕壅盛組），健康體檢者（設為正常組）25例。各組病例資料見表1。
1.1.2 診斷標準西醫(yī)診斷標準按照2005年《中國高血壓防治指南》修訂版中EH的診斷標準。中醫(yī)證候診斷標準參照中華人民共和國國家藥品監(jiān)督管理局2002年制定頒布的《中藥新藥臨床研究指導原則·中藥新藥治療高血壓病的臨床研究指導原則》中陰虛陽亢型或痰濕壅盛型的診斷標準。
1.1.3 納入標準西醫(yī)診斷為EH；中醫(yī)診斷為陰虛陽亢型或痰濕壅盛型。
1.1.4 排除標準年齡在 45歲以下或 70歲以上；繼發(fā)性高血壓；感染性疾病患者。
1.2 試劑及儀器人淋巴細胞分離液（晶美公司）、Trizol（MRC公司）、半定量逆轉錄多聚酶鏈式反應試劑盒（Fermentas公司）、PCR試劑盒（Fermentas公司）、DNA marker（Fermentas公司）、PPARγ引物（上游引物：5'-CAAGACAACCTGCTACAAGC-3' 下游引物：5'-TCCTTGTAGATCTCCTGCAG-3‘， 上海生工工程技術服務有限公司）、β-actin引物（上游引物：5'- TAAAGACCTCTATGCCAACACAGT-3' 下游引物：5'-CACGATGGAGGGGCCGGACTCATC-3' ，上海生工工程技術服務有限公司）、瓊脂糖（Amresco公司）、EB（Sigma公司）。低溫離心機（Journ公司）、PCR儀（PXE0.2，Thermo公司）、電泳儀（DYY-8C型，北京市八一儀器廠）、凝膠成像分析系統(tǒng)（Vilber lourmat公司）、彩色多普勒超聲診斷儀（PowerVision6000，日本東芝） 。
1.3 RT-PCR法檢測外周血淋巴細胞PPAPγ mRNA表達［3］抽清晨空腹肘靜脈肝素抗凝血，1 000 r/min離心1 min，棄上清；鹽水與血等體積混勻稀釋；1 ml淋巴細胞分離液面上，用滴管沿壁緩慢加2 ml稀釋血；2 000 r/min離心20 min；管內分為4層，吸出云霧層（淋巴細胞）；用5×生理鹽水稀釋，1 500 r/min離心10min，重復1次，分離淋巴細胞。提取細胞總RNA，總RNA逆轉錄成cDNA，PCR擴增，反應條件：94℃預變性5 min，94℃變性30s，58℃退火45 s，72℃延伸45 s，共35個循環(huán)，72℃延伸5 min。PCR產物瓊脂糖凝膠電泳，凝膠攝像系統(tǒng)采集電泳圖像，用PPARγ條帶灰度與β-actin標準條帶的比值進行半定量分析。
1.4 彩色多普勒超聲測量頸總動脈內膜-中膜厚度由專人操作將探頭置于頸部縱橫掃查，觀察頸總動脈，頸內動脈、頸外動脈，測量頸總動脈內膜-中膜厚度（IMT）。
1.5 統(tǒng)計處理計量資料數(shù)據(jù)均用±s表示，采用SPSS12.0軟件進行分析，組間比較用單因素方差分析，以P<0.05具有統(tǒng)計學意義。
2 結果
各組PPARγ mRNA表達與正常對照組（0.77±0.11）比較，陰虛陽亢型組（0.35±0.10）及痰濕壅盛型（0.22±0.11）患者PPARγ mRNA表達減弱，組間比較具有顯著性差異（P<0.05）。與陰虛陽亢型組比較，痰濕壅盛組PPARγ mRNA表達下調明顯（P<0.05）。各組頸動脈血管病變與正常對照組比較，陰虛陽亢型和痰濕壅盛型高血壓患者IMT增厚，組間比較具有顯著性差異（P<0.05）。與陰虛陽亢型組比較，痰濕壅盛型IMT增厚明顯（P<0.05）。
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