犀羚解毒丸中甘草酸含量的HPLC測(cè)定方法

　　1 儀器與試藥

　　Waters1515高效液相色譜儀,Waters2487紫外可見(jiàn)光檢測(cè)器,Mellennium32色譜工作站(美國(guó)Waters公司)；KQ-250型超聲波清洗器,Mettler Toledo AG135十萬(wàn)分之一電子分析天平。

　　甘草酸銨對(duì)照品(購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào)110731-200511)；犀羚解毒丸制劑(由北京同仁堂集團(tuán)股份有限公司提供,批號(hào)6013957、6013958、6013959)。甲醇(色譜純),水為純凈水,其他試劑均為分析純。

　　2 方法與結(jié)果

　　2.1 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性

　　色譜柱：Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-[0.2 mol/L醋酸銨-冰醋酸(33∶1)](64∶36)；檢測(cè)波長(zhǎng)：250 nm；流速：1.0 mL/min。

　　2.2 溶液的制備

　　2.2.1 對(duì)照品溶液的制備

　　精密稱取在五氧化二磷干燥器中干燥至恒重的甘草酸銨對(duì)照品1.25 mg,置25 mL量瓶中,加流動(dòng)相溶解并定容至刻度,搖勻,作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液5 mL,置10 mL量瓶中,加流動(dòng)相溶解并定容至刻度,搖勻,即得25 μg/mL甘草酸銨對(duì)照品溶液(折合甘草酸24.487 5 μg)。

　　2.2.2 供試品溶液的制備

　　取犀羚解毒丸(批號(hào)6013957)適量,與硅藻土按6∶4比例粉碎并均勻混合成中粉,取上述粉末8.0 g,精密稱定,置250 mL具塞錐形瓶中,加入40%甲醇100 mL,稱定重量,超聲處理(功率250 W,頻率40 kHz)30 min,放冷,用40%甲醇補(bǔ)是減失的重量,搖勻,靜置,離心,分取上清液濾過(guò),取續(xù)濾液作為供試品溶液。

　　2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備

　　按處方比例稱取除甘草以外的其他藥味,依照犀羚解毒丸的生產(chǎn)工藝制成陰性制劑,再按供試品溶液制備方法制成缺甘草的陰性對(duì)照溶液。

　　2.3 線性關(guān)系考察

　　分別精密吸取25 μg/mL甘草酸銨對(duì)照品溶液3、5、8、10、13、15 μL。在上述色譜條件下,分別注入液相色譜儀測(cè)定。以甘草酸銨的進(jìn)樣量(μg)分別對(duì)相應(yīng)峰面積積分值進(jìn)行線性回歸,得回歸方程：Y＝788 206X－8 096.4(r＝0.999 6)。結(jié)果表明,對(duì)照品進(jìn)樣量在0.075～0.375 μg范圍內(nèi),甘草酸銨峰面積與進(jìn)樣量呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

　　2.4 空白試驗(yàn)

　　分別吸取甘草酸銨對(duì)照品溶液、犀羚解毒丸供試品溶液及缺甘草的陰性對(duì)照溶液10 μL,注入液相色譜儀,按上述方法分別測(cè)定,得到相應(yīng)的色譜圖。結(jié)果表明：犀羚解毒丸供試品溶液的色譜圖在與甘草酸銨對(duì)照品相應(yīng)保留時(shí)間處出現(xiàn)甘草酸的色譜峰；而缺甘草的陰性對(duì)照溶液色譜圖在相同保留時(shí)間處沒(méi)有出現(xiàn)上述色譜峰,說(shuō)明制劑中其他成分對(duì)甘草酸的測(cè)定不產(chǎn)生干擾。

　　2.5樣品測(cè)定

　　精密稱取3批不同批號(hào)犀羚解毒丸制劑,每批平行測(cè)定3份,按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,并在上述色譜條件下測(cè)定,計(jì)算樣品中甘草酸的含量,結(jié)果見(jiàn)表2。表2 甘草酸含量測(cè)定結(jié)果(略)

　　3 討論

　　本試驗(yàn)考察了超聲處理不同時(shí)間、加入不同體積提取溶劑的樣品中甘草酸的含量,結(jié)果表明超聲提取30 min、溶劑量為100 mL可提取完全。取甘草酸銨對(duì)照品溶液適量,經(jīng)紫外光譜掃描,其最大吸收波長(zhǎng)為250 nm,因而選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為250 nm。

　　根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道=,并經(jīng)預(yù)試驗(yàn),對(duì)藥典中流動(dòng)相進(jìn)行了優(yōu)選,確定甲醇-[0.2 mol/L醋酸銨∶冰醋酸(33∶1)](64∶36)為流動(dòng)相,色譜柱為Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm),所得色譜圖的分離度好,保留時(shí)間較合適。故本試驗(yàn)選用的流動(dòng)相為甲醇-[0.2 mol/L醋酸銨-冰醋酸(33∶1)](64∶36),并將該條件的色譜圖記錄下來(lái),以被測(cè)組分甘草酸峰計(jì)算理論塔板數(shù),并計(jì)算甘草酸與相鄰峰的分離度。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果,考慮到儀器、色譜柱、流動(dòng)相的配制和溫度等系統(tǒng)因素的影響,規(guī)定理論塔板數(shù)按甘草酸銨峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。

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